{"id":487,"date":"2020-03-20T10:30:22","date_gmt":"2020-03-20T13:30:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/femurdistal\/?p=487"},"modified":"2020-03-20T10:30:24","modified_gmt":"2020-03-20T13:30:24","slug":"mini-celulas-que-curam-metodo-inovador-propoe-uso-sustentavel-de-plaquetas-sanguineas-em-terapia-celular-e-medicina-regenerativa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/femurdistal\/2020\/03\/20\/mini-celulas-que-curam-metodo-inovador-propoe-uso-sustentavel-de-plaquetas-sanguineas-em-terapia-celular-e-medicina-regenerativa\/","title":{"rendered":"Mini c\u00e9lulas que curam: m\u00e9todo inovador prop\u00f5e uso sustent\u00e1vel de plaquetas sangu\u00edneas em terapia celular e medicina regenerativa"},"content":{"rendered":"

Autoras: Sheila Siqueira Andrade e Alessandra Val\u00e9ria de Sousa Faria<\/strong><\/p>\n

Plaquetas s\u00e3o pe\u00e7a-chave no processo de cicatriza\u00e7\u00e3o e regenera\u00e7\u00e3o da maioria dos tecidos do corpo. O problema \u00e9 a dificuldade de armazenamento, que leva ao desperd\u00edcio e descarte de grande quantidade desse precioso hemoderivado. <\/strong><\/p>\n

O grande desafio atual da Biotecnologia \u00e9 fornecer solu\u00e7\u00f5es aplicadas \u00e0 medicina e \u00e0 sa\u00fade, recriadas em laborat\u00f3rio com um padr\u00e3o pr\u00f3ximo ao que ocorre em nosso organismo. Seguindo os conceitos de Biomimetismo<\/strong> (imita\u00e7\u00e3o da vida), a PlateInnove Biotechnology<\/strong><\/a>, uma startup brasileira resolveu inovar e desenvolveu projetos na \u00e1rea de bioativa\u00e7\u00e3o de \u201cminic\u00e9lulas\u201d (plaquetas) sangu\u00edneas humanas. Atrav\u00e9s do desenvolvimento de uma plataforma biotecnol\u00f3gica, na qual plaquetas (mat\u00e9ria-prima) s\u00e3o seletivamente bioativadas para a produ\u00e7\u00e3o de um painel de fatores de crescimento customizados destinados \u00e0s \u00e1reas de pesquisa e desenvolvimento, veterin\u00e1ria e cosm\u00e9tica.<\/p>\n

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Desmistificando as Plaquetas<\/strong><\/p>\n

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O processo de cicatriza\u00e7\u00e3o de uma \u201cpequena<\/em>\u201d ferida n\u00e3o \u00e9 algo marcante que fique na mem\u00f3ria. \u00c9 prov\u00e1vel que a maioria das pessoas n\u00e3o se lembre da \u00faltima vez que sofreu um pequeno corte. Talvez algumas sensa\u00e7\u00f5es sejam associadas ao evento como uma dor inesperada, uma pontada aguda e a imediata vis\u00e3o de sangue saindo lentamente da ferida. O primeiro instinto \u00e9 proteger a ferida com um pequeno curativo a fim de interromper a perda de sangue. Mas sem preocupa\u00e7\u00e3o. E porque agimos naturalmente diante desse sangramento, sem tentar descobrir como e quando esse sangramento vai parar?<\/em> A resposta \u00e9 simples, sabemos que nosso corpo cuidar\u00e1 disso. A raz\u00e3o pela qual n\u00e3o sangraremos at\u00e9 a morte, toda vez que nos cortamos, se deve principalmente a minic\u00e9lulas<\/em> do nosso sangue chamadas plaquetas (figura 1).<\/p>\n

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Fotografias e ilustra\u00e7\u00e3o das plaquetas humanas, as mini c\u00e9lulas que curam.<\/figcaption><\/figure>\n

Nosso sangue \u00e9 composto por diferentes tipos de c\u00e9lulas suspensas num flu\u00eddo denominado plasma. Dentre essas c\u00e9lulas destacamos as plaquetas, c\u00e9lulas (anucleadas), de ontog\u00eanese fragment\u00e1ria (a partir de sua c\u00e9lula progenitora, megacari\u00f3cito), em formato de disco, extremamente pequenas (1 a 2 \u03bcm), produzidas na medula \u00f3ssea e no pulm\u00e3o, que circulam no sangue em seu estado de repouso.(1,2)<\/sup> Em uma pessoa saud\u00e1vel encontramos de 150 a 300 mil plaquetas (por microlitro de sangue) circulando na corrente sangu\u00ednea, por at\u00e9 10 dias (seu tempo de vida \u00fatil).(3)<\/sup> Como protagonistas da coagula\u00e7\u00e3o do sangue (mantenedoras da integridade de vasos sangu\u00edneos impedindo sangramentos) e altamente especializadas, essas \u201cminic\u00e9lulas\u201d<\/em> transitam em processos din\u00e2micos e cruciais para a manuten\u00e7\u00e3o do equil\u00edbrio do nosso organismo, como o processo inflamat\u00f3rio e sistema imunol\u00f3gico. Por ser uma \u201cminic\u00e9lula<\/em>\u201d especializada, \u00e9 de sua responsabilidade a primeira avalia\u00e7\u00e3o e os primeiros reparos no tecido lesionado. Ou seja, plaquetas s\u00e3o \u201csoldados de fronte de batalha\u201d<\/em>. Carregam em seu interior uma vasta quantidade de compartimentos\/organelas e gr\u00e2nulos (\u03b1 -alfa e denso) respons\u00e1veis pelo estoque de mol\u00e9culas e \u00edons (c\u00e1lcio e magn\u00e9sio) biologicamente influentes. No interior dos gr\u00e2nulos \u03b1 n\u00e3o est\u00e3o apenas fatores de coagula\u00e7\u00e3o do sangue, mas tamb\u00e9m compostos efetores como fatores de crescimento, mensageiros do sistema imune e enzimas, importantes por controlar situa\u00e7\u00f5es dif\u00edceis, como um corte simples ou mesmo um dano tecidual extenso.(3)<\/sup> Em resposta ao corte\/ferimento o organismo envia sinais de alerta atrav\u00e9s da corrente sangu\u00ednea, notificando as plaquetas do trauma. Sendo as \u201cprimeiras\u201d<\/em> c\u00e9lulas a chegarem ao local da les\u00e3o, as plaquetas s\u00e3o ativadas com consequente libera\u00e7\u00e3o seletiva dos mediadores de seus compartimentos, recrutando outras plaquetas nas proximidades e iniciando a sua mudan\u00e7a de forma, de estado de repouso\/quiescente no formato de \u201cdisco\u201d<\/em> para uma forma \u201cestelar\u201d<\/em>, sua forma ativada com forma\u00e7\u00e3o de pseud\u00f3podes.(4,5)<\/sup><\/p>\n

O recrutamento de outras plaquetas \u00e9 facilitado pelo fato de sua superf\u00edcie ser preenchida por estruturas que servem como identificadores\/biossensores\/receptores aos fatores plaquet\u00e1rios liberados neste processo, um processo de reconhecimento entre plaquetas. Isso as ajuda a ficar unidas. Essa uni\u00e3o \u00e9 conhecida como agrega\u00e7\u00e3o plaquet\u00e1ria<\/strong> que envolve in\u00fameras plaquetas.  Ao mesmo tempo, outros fatores de coagula\u00e7\u00e3o<\/strong> est\u00e3o em a\u00e7\u00e3o. Uma prote\u00edna no sangue chamada fibrinog\u00eanio<\/strong> se torna ativa tamb\u00e9m. E uma vez ativa, essa prote\u00edna recebe o nome de fibrina<\/strong> e, como o pr\u00f3prio nome sugere, produz fibras que atuam em conjunto com as plaquetas. Essas fibras cobrem a ferida e criam uma rede e, portanto, menos sangue pode escapar. No entanto, as plaquetas ainda precisam terminar seu trabalho, com a forma\u00e7\u00e3o de um agregado plaquet\u00e1rio contendo gl\u00f3bulos vermelhos que funciona como um \u201ctamp\u00e3o\u201d <\/em>(curativo), um co\u00e1gulo<\/strong>, impedindo a perda de sangue (figura 2).(4-6)<\/sup><\/p>\n

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Plaquetas se agregam ap\u00f3s serem ativadas e promovem a forma\u00e7\u00e3o do co\u00e1gulo sangu\u00edneo.<\/figcaption><\/figure>\n

Ainda no local da les\u00e3o, as plaquetas iniciam o recrutamento de outros tipos celulares, onde a libera\u00e7\u00e3o de seus fatores de crescimento internos \u00e9 novamente crucial. Uma vez liberados, os fatores de crescimento plaquet\u00e1rios atuam como guias (quimiot\u00e1ticos) e suplemento nutritivo para c\u00e9lulas como mon\u00f3citos\/macr\u00f3fagos(6)*<\/sup>,  granul\u00f3citos, fibroblastos, epiteliais e at\u00e9 as pr\u00f3prias c\u00e9lulas do vaso sangu\u00edneo. E assim, sem perda de sangue, inicia-se o processo de cicatriza\u00e7\u00e3o da ferida, e regenera\u00e7\u00e3o do tecido.<\/strong><\/p>\n

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Uso off label<\/em> do concentrado de plaquetas<\/strong><\/p>\n

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Como se v\u00ea, a plaqueta \u00e9 pe\u00e7a crucial em nosso organismo, por fazer parte da maquinaria da coagula\u00e7\u00e3o do sangue, e por isso est\u00e3o sempre em alta demanda. Pacientes que sofreram traumas (e que perderam muito sangue), em tratamentos quimioter\u00e1picos e submetidos \u00e0 cirurgia, muitas vezes precisam de transfus\u00f5es de plaquetas para manter o sangue funcionando adequadamente. O mesmo acontece com as pessoas com dist\u00farbios gen\u00e9ticos, que as impedem de produzir plaquetas suficientes por conta pr\u00f3pria, causando baixa contagem de plaquetas (trombocitopenia). Como consequ\u00eancia, aparecem sangramentos espont\u00e2neos e um pequeno corte pode se tornar algo mais grave. No entanto, as plaquetas s\u00e3o escassas em compara\u00e7\u00e3o aos outros produtos sangu\u00edneos, em parte devido \u00e0 sua curta vida \u00fatil.<\/p>\n

Nos bancos de sangue, os gl\u00f3bulos vermelhos podem ser armazenados em refrigerador (4\u00b0C) por 42 dias, e o plasma pode ser congelado (-80\u00b0C) por anos. No entanto, plaquetas precisam ser armazenadas \u00e0 temperatura ambiente (22\u00b0C) sob leve agita\u00e7\u00e3o, e apenas por um curto per\u00edodo (5 dias), devido \u00e0 grande probabilidade de contamina\u00e7\u00e3o bacteriana.<\/strong> O que significa que poucas plaquetas est\u00e3o dispon\u00edveis para aqueles que precisam delas. Essa situa\u00e7\u00e3o \u00e9 contradit\u00f3ria, porque apesar de faltar plaquetas para transfus\u00e3o, h\u00e1 tamb\u00e9m perda expressiva por vencimento do prazo de validade. Cerca de 20% das unidades de plaquetas produzidas nos bancos de sangue acabam virando lixo\/<\/strong>res\u00edduo biol\u00f3gico, por n\u00e3o estarem vi\u00e1veis para as pr\u00e1ticas hemoter\u00e1picas. Neste cen\u00e1rio, PlateInnove Biotechnology <\/a>surge em 2017 com a proposta de aproveitar esse nobre material de maneira segura<\/strong>, estruturando um neg\u00f3cio de impacto biotecnol\u00f3gico, social e ambiental. Com uma plataforma de bioativa\u00e7\u00e3o de plaquetas<\/strong> (mat\u00e9ria-prima) gera-se uma produ\u00e7\u00e3o customizada de prote\u00ednas de alto valor biol\u00f3gico<\/strong> e de alto valor agregado destinadas \u00e0s \u00e1reas de pesquisa e desenvolvimento, veterin\u00e1ria e cosm\u00e9tica.<\/strong> Dentro do atual panorama brasileiro de empreendedorismo, a start-up segue alinhada com as recomenda\u00e7\u00f5es sinalizadas pela Organiza\u00e7\u00e3o Mundial de Sa\u00fade(9)<\/sup> (OMS, do ingl\u00eas WHO, World Health Organization), que prop\u00f5em o reaproveitamento racional das unidades de plaquetas.<\/p>\n

Obten\u00e7\u00e3o das Plaquetas<\/strong><\/p>\n

As unidades de plaquetas foram obtidas dos servi\u00e7os do Hemocentro de Campinas\/UNICAMP, do Hemocentro de Ribeir\u00e3o Preto\/USP e da COLSAN (Associa\u00e7\u00e3o Beneficente de Coleta de Sangue). E como os bancos de sangue produzem as unidades de plaquetas? <\/em>A partir do sangue total doado por volunt\u00e1rios, os bancos de sangue processam o sangue para a produ\u00e7\u00e3o das unidades de plaquetas majoritariamente por uma t\u00e9cnica denominada \u201cbuffy coat\u201d<\/em> e minoritariamente por \u201cPRP\u201d<\/em> (plasma rico em plaquetas).<\/strong> Do restante do sangue tamb\u00e9m s\u00e3o produzidas as unidades\/bolsas de hem\u00e1cias, plasma e o crioprecipitado. Para a plataforma, utilizamos as unidades de plaquetas do quinto dia de processamento, j\u00e1 expiradas. O projeto de pesquisa tem a aprova\u00e7\u00e3o do comit\u00ea de \u00e9tica, via plataforma Brasil, o apoio da FAPESP (Funda\u00e7\u00e3o de Amparo a Pesquisa do Estado de S\u00e3o Paulo) e aprova\u00e7\u00e3o pelas comiss\u00f5es de pesquisa dos Hemocentros parceiros.<\/p>\n

Vale ressaltar que devido as especifica\u00e7\u00f5es de aplica\u00e7\u00f5es finais dos produtos, as unidades de plaquetas s\u00e3o manipuladas em capela de fluxo de ar laminar devidamente instalada em laborat\u00f3rio apropriado para o cultivo de c\u00e9lulas, seguindo as normas de biosseguran\u00e7a<\/strong>.<\/p>\n

Como analisar o que n\u00e3o enxergamos?<\/em><\/strong> Ativa\u00e7\u00e3o de Plaquetas por Citometria de Fluxo <\/strong><\/p>\n

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Para certificar o grau de pureza e integridade das prepara\u00e7\u00f5es de plaquetas, utilizamos a t\u00e9cnica de citometria de fluxo para<\/p>\n

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  1. separa\u00e7\u00e3o de c\u00e9lulas ativadas atrav\u00e9s de uso de sondas;<\/li>\n
  2. quantifica\u00e7\u00e3o da porcentagem de c\u00e9lulas contaminantes;<\/li>\n<\/ol>\n