{"id":478,"date":"2011-03-19T19:35:37","date_gmt":"2011-03-19T22:35:37","guid":{"rendered":"http:\/\/synbiobrasil.org\/?p=478"},"modified":"2011-03-19T19:35:37","modified_gmt":"2011-03-19T22:35:37","slug":"problemas-com-pcr","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/2011\/03\/19\/problemas-com-pcr\/","title":{"rendered":"Problemas com PCR!"},"content":{"rendered":"

Ap\u00f3s desenhar o seu primer, \u00a0montar a sua rea\u00e7\u00e3o<\/a> e programar o termociclador<\/a>, voc\u00ea pode enfrentar problemas para otimizar as sua condi\u00e7\u00f5es de PCR. Algumas simples a\u00e7\u00f5es podem resultar em um produto de PCR espec\u00edfico. Estas s\u00e3o as quest\u00f5es mais comuns aqui no laborat\u00f3rio:<\/p>\n

1. Estou tendo (muitos) fragmentos\u00a0inespec\u00edficos maiores do que o esperado. O que fazer?<\/strong><\/p>\n

– Diminuir o tempo de anelamento da rea\u00e7\u00e3o;<\/p>\n

– Aumentar a temperatura de anelamento (aumento 2 graus a cada teste);<\/p>\n

– Diminuir o tempo de extens\u00e3o;<\/p>\n

– Colocar menos primers;<\/p>\n

– Checar e colocar menos DNA;<\/p>\n

2. Estou obtendo fragmentos inespec\u00edficos menores do que o esperado. O que fazer?<\/strong><\/p>\n

– Aumentar a temperatura de anelamento;<\/p>\n

– Aumentar o tempo de anelamento;<\/p>\n

– Aumentar a temperatura de extens\u00e3o;<\/p>\n

– Aumentar a temperatura de extens\u00e3o para 74-78 oC;<\/p>\n

– Colocar menos primers e\/ou menos DNA.<\/p>\n

3. A rea\u00e7\u00e3o estava funcionando antes, mas agora eu n\u00e3o obtenho nenhum produto.<\/strong><\/p>\n

– Tenha certeza que todos os componentes est\u00e3o na rea\u00e7\u00e3o (tamp\u00e3o, DNA, primers…);<\/p>\n

– Teste um novo Master Mix ou uma nova solu\u00e7\u00e3o de dNTP (s\u00e3o sens\u00edveis a descongelamentos consecutivos);<\/p>\n

– Utilize um estoque novo de primers;<\/p>\n

– Diminua sua temperatura de anelamento 6-10 oC, se n\u00e3o obtiver nenhum fragmento verifique todas os componentes.<\/p>\n

Nos pr\u00f3ximos posts vou comentar sobre t\u00e9cnicas de PCR: como RT-PCR, dele\u00e7\u00e3o de genes…<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Ap\u00f3s desenhar o seu primer, \u00a0montar a sua rea\u00e7\u00e3o e programar o termociclador, voc\u00ea pode enfrentar problemas para otimizar as sua condi\u00e7\u00f5es de PCR. Algumas simples a\u00e7\u00f5es podem resultar em um produto de PCR espec\u00edfico. Estas s\u00e3o as quest\u00f5es mais comuns aqui no laborat\u00f3rio: 1. Estou tendo (muitos) fragmentos\u00a0inespec\u00edficos maiores do que o esperado. O […]<\/p>\n","protected":false},"author":498,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_monsterinsights_skip_tracking":false,"pgc_sgb_lightbox_settings":"","_vp_format_video_url":"","_vp_image_focal_point":[],"footnotes":""},"categories":[20],"tags":[86,395,404,430,431,447],"class_list":["post-478","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-pcr","tag-biologia-molecular","tag-otimizacao-de-pcr","tag-pcr","tag-problemas-com-pcr","tag-procedimento","tag-protocolo"],"jetpack_featured_media_url":"","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/478","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/users\/498"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=478"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/478\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=478"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=478"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.blogs.unicamp.br\/synbiobrasil\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=478"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}